Fluorescenčna mikroskopija je spremenila našo sposobnost vizualizacije in preučevanja bioloških vzorcev, kar nam omogoča, da se poglobimo v zapleten svet celic in molekul. Ključna komponenta fluorescenčne mikroskopije je vir svetlobe, ki se uporablja za vzbujanje fluorescenčnih molekul v vzorcu. Skozi leta so bili uporabljeni različni viri svetlobe, vsak s svojimi edinstvenimi značilnostmi in prednostmi.
1. Živosrebrna svetilka
Visokotlačna živosrebrna svetilka z močjo od 50 do 200 vatov je izdelana iz kremenčevega stekla in je sferične oblike. V notranjosti vsebuje določeno količino živega srebra. Pri delovanju pride do razelektritve med dvema elektrodama, zaradi česar živo srebro izhlapi, notranji tlak v krogli pa hitro narašča. Ta postopek običajno traja približno 5 do 15 minut.
Emisija visokotlačne živosrebrne žarnice je posledica razpada in redukcije molekul živega srebra med razelektritvijo elektrode, kar vodi do emisije svetlobnih fotonov.
Oddaja močno ultravijolično in modro-vijolično svetlobo, zaradi česar je primeren za vzbujanje različnih fluorescentnih materialov, zato se široko uporablja v fluorescenčni mikroskopiji.
2. Ksenonske žarnice
Drug pogosto uporabljen vir bele svetlobe v fluorescenčni mikroskopiji je ksenonska žarnica. Ksenonske sijalke, tako kot živosrebrne žarnice, zagotavljajo širok spekter valovnih dolžin od ultravijoličnega do skoraj infrardečega. Razlikujejo pa se po svojih vzbujevalnih spektrih.
Živosrebrne sijalke koncentrirajo svoje emisije v skoraj ultravijoličnem, modrem in zelenem območju, kar zagotavlja ustvarjanje svetlih fluorescenčnih signalov, vendar ima močno fototoksičnost. Zato so sijalke HBO običajno rezervirane za fiksne vzorce ali slikanje s šibko fluorescenco. V nasprotju s tem imajo viri ksenonskih žarnic bolj gladek profil vzbujanja, kar omogoča primerjavo jakosti pri različnih valovnih dolžinah. Ta lastnost je ugodna za aplikacije, kot so meritve koncentracije kalcijevih ionov. Ksenonske žarnice kažejo tudi močno vzbujanje v bližnjem infrardečem območju, zlasti okoli 800-1000 nm.
Sijalke XBO imajo naslednje prednosti pred sijalkami HBO:
① Bolj enakomerna spektralna intenzivnost
② Močnejša spektralna intenzivnost v infrardečem in srednjem infrardečem območju
③ Večji izhod energije, kar olajša doseganje zaslonke objektiva.
3. LED diode
V zadnjih letih se je na področju svetlobnih virov fluorescenčne mikroskopije pojavil nov tekmec: LED. LED diode nudijo prednost hitrega vklopa in izklopa v milisekundah, s čimer skrajšajo čas izpostavljenosti vzorcev in podaljšajo življenjsko dobo občutljivih vzorcev. Poleg tega LED-svetloba kaže hitro in natančno razpadanje, kar znatno zmanjša fototoksičnost med dolgotrajnimi eksperimenti z živimi celicami.
V primerjavi z viri bele svetlobe LED diode običajno oddajajo v ožjem spektru vzbujanja. Vendar pa je na voljo več pasov LED, kar omogoča vsestranske večbarvne fluorescenčne aplikacije, zaradi česar so LED vedno bolj priljubljena izbira v sodobnih nastavitvah fluorescenčne mikroskopije.
4. Laserski vir svetlobe
Viri laserske svetlobe so zelo monokromatski in usmerjeni, zaradi česar so idealni za mikroskopijo z visoko ločljivostjo, vključno s tehnikami visoke ločljivosti, kot sta STED (Stimulated Emission Depletion) in PALM (Photoactivated Localization Microscopy). Laserska svetloba je običajno izbrana tako, da ustreza specifični valovni dolžini vzbujanja, ki je potrebna za ciljni fluorofor, kar zagotavlja visoko selektivnost in natančnost pri vzbujanju fluorescence.
Izbira vira svetlobe za fluorescenčni mikroskop je odvisna od posebnih eksperimentalnih zahtev in značilnosti vzorca. Prosimo, kontaktirajte nas, če potrebujete pomoč
Čas objave: 13. septembra 2023